Prescript Ⅲ RT ProMix For qPCR（+gDNA clearer）
——更高效的qRT-PCR專用預(yù)混液（去基因組）
產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品基于PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase，包含合成高質(zhì)量cDNA所需的所有成分，適用于兩步法RT-qPCR檢測(cè)。通過(guò)定點(diǎn)突變得到的PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase是RNase H活性缺失的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率得到大幅提升。4×gDNA clearer可徹底去除殘留的基因組DNA污染，保證后續(xù)定量結(jié)果更加可靠。10× RT Reaction Mix包含優(yōu)化的緩沖體系、Oligo (dT)23VN、Random hexamers、dNTPs和gDNA clearer終止成分，保證cDNA的完整性。此外，產(chǎn)品針對(duì)qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化，比例優(yōu)化的Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix，可以在15min內(nèi)短時(shí)高效地合成qPCR所用的模板cDNA。
產(chǎn)品內(nèi)容
組分 | R421A | R421B |
4× gDNA clearer | 200μL | 400μL |
10× RT Reaction Mix | 100μL | 200μL |
Prescript Ⅲ Enzyme Mix | 100μL | 200μL |
RNase-free ddH2O | 1mL | 1mL |
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
更高的熱穩(wěn)定性和cDNA合成效率：全新的逆轉(zhuǎn)錄酶PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase具有更好的熱穩(wěn)定性和更高的cDNA合成效率
優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄性能：在50℃條件下也可以對(duì)具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
對(duì)模板兼容性強(qiáng)：兼容不同物種及完整度較差的Total RNA
強(qiáng)勁的基因組DNA清除效率：4× gDNA clearer可徹底去除殘留的基因組DNA污染，保證后續(xù)定量結(jié)果更加可靠
實(shí)驗(yàn)案例
gDNA Remover對(duì)基因組DNA去除效果的確認(rèn)
| gDNA Remover | RTase |
| － | － |
| － | ＋ |
| ＋ | － |
| ＋ | ＋ |
為了確認(rèn)gDNA Remover對(duì)基因組DNA的去除效果，按以上表格條件進(jìn)行了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，接著用同一基因進(jìn)行Realtime PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，用gDNA Remover處理后，即在③的條件時(shí)，沒(méi)有擴(kuò)增出現(xiàn)，可以確認(rèn)基因組DNA已被去除掉。
2. 與其他公司同類型產(chǎn)品基因組DNA去除能力的比較
在HeLa total RNA中添加過(guò)量的人基因組DNA，與其他公司同類型試劑盒進(jìn)行基因組DNA去除能力的比較模擬實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，本產(chǎn)品去除基因組DNA效果更加明顯。
3.優(yōu)異的cDNA合成效率
在10μL反應(yīng)體系中分別添加HeLa細(xì)胞來(lái)源的Total RNA 0.5μg~0.5pg，分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，在Realtime PCR反應(yīng)液(使用本公司S018產(chǎn)品)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液各1% (V/V)，用Realtime PCR對(duì)ACTB和B2M的cDNA量進(jìn)行定量，然后進(jìn)行cDNA合成量的比較。結(jié)果可見(jiàn)，在探討的范圍內(nèi)，模板RNA的量和cDNA的得率密切相關(guān)，但無(wú)論模板RNA量的多寡，仍可維持很高的cDNA合成效率?？梢?jiàn)在目的片段濃度有差異的樣品之間，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率的變化并不大，因此可將定量結(jié)果的誤差控制在最小范圍內(nèi)。
4.與其他公司逆轉(zhuǎn)錄性能的比較
以梯度稀釋的HeLa細(xì)胞Total RNA為模板，在說(shuō)明書(shū)提供的反應(yīng)體系及反應(yīng)條件下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后用Realtime PCR 進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，與A公司同類產(chǎn)品相比，PreScript Ⅲ Reverse Transcriptase產(chǎn)品具有更高的逆轉(zhuǎn)錄性能。
5.對(duì)不同模板的逆轉(zhuǎn)錄能力
以HeLa細(xì)胞Total RNA為模板，挑選高、中、低三種表達(dá)量的基因，在說(shuō)明書(shū)提供的反應(yīng)體系及反應(yīng)條件下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后用Realtime PCR檢測(cè)多對(duì)基因，結(jié)果表明，對(duì)不同表達(dá)量的基因，本產(chǎn)品都具有優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄能力。
應(yīng)用范圍
合成用于qPCR的cDNA模板，高質(zhì)量 cDNA合成；全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建等。
產(chǎn)品儲(chǔ)存
-20℃保存
